附件2（略）

附件3（略）

附件4

说明书和标签

非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书和内包装标签

（一）非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒

商品名 无

英文名 ELISA Kit for Detection of Antibodies Against African Swine Fever Virus

汉语拼音 Feizhouzhuwen Bingdu ELISA Kangti Jiance Shijihe

【主要成分与含量】

（1）抗原包被板	2块（96孔/块）
（2）阳性对照血清	1管（1.5ml/管）
（3）阴性对照血清	1管（1.5ml/管）
（4）兔抗猪酶标二抗	2瓶（12ml/瓶）
（5）样品稀释液	1瓶（24ml/瓶）
（6）20倍浓缩洗涤液	2瓶（50ml/瓶）
（7）底物液A	1瓶（12ml/瓶）
（8）底物液B	1瓶（12ml/瓶）
（9）终止液	1瓶（12ml/瓶）
（10）血清稀释板	2块（96孔/块）
（11）说明书	1份
【作用与用途】 用于检测猪血清中非洲猪瘟病毒抗体。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品制备 取动物全血，待血液凝固后，以3500r/min离心10分钟，收集上清，也可采集血液，待凝固后自然析出血清，要求血清清亮，无溶血。

1.2 洗涤液配制 使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温，如果有沉淀，37℃水浴使其溶解，然后用去离子水稀释20倍备用。

1.3 样品稀释 在血清稀释板中按1∶20的比例稀释待检血清（7μl血清+133μl样品稀释液），阴、阳性对照血清已稀释，可直接使用。

1.4 操作步骤

1.4.1 加样 取抗原包被板，将稀释好的待检血清、阴性对照和阳性对照加入到抗原包被板中，100μl/孔。每份待检血清设1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，加样过程时间跨度应尽量短。酶标板上对照血清和待检血清添加模式如下所示。

1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	S1
B	S2
C	S3
D	S4
E
P
F
P
G
N
H
N
注：S1、S2、S3、S4等表示加各待检血清；P：表示加阳性对照血清；N：表示加阴性对照血清。

1.4.2 温育 震荡混匀（勿溢出），置37℃温箱内孵育30分钟。

1.4.3 洗板 弃去反应液，每孔加入洗涤液300μl，浸泡15秒，甩弃洗涤液。连续洗板5次后拍干。

1.4.4 加酶 各孔加入兔抗猪酶标二抗100μl。

1.4.5 温育 置37℃温箱内孵育30分钟。

1.4.6 洗板 弃去反应液，每孔加入洗涤液300μl，浸泡15秒，甩弃洗涤液。连续洗板5次后拍干。

1.4.7 显色 各孔加入100μl底物工作液（将底物液A和底物液B等量混合即为底物工作液，现用现配），震荡混匀，置37℃温箱内避光反应15分钟。

1.4.8 终止 各孔加入显色终止液50μl，振荡混匀终止反应，15分钟内测定结果。

2 判定 在酶标仪上测各孔OD450nm值。

2.1 试验成立的条件是：阳性对照孔OD450nm值应介于0.9～2.0之间，阴性对照孔OD450nm值均应≤0.15；

2.2 阳性临界值（Cut–off值）=阳性对照孔OD450nm均值×0.17；

2.3 样品OD450nm值≥阳性对照孔OD450nm均值×0.17，判为阳性；样品OD450nm值＜阳性对照孔OD450nm均值×0.15，判为阴性；两者之间判为可疑。

【注意事项】 （1）将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用，液体试剂用前混匀。洗涤液若有结晶析出，轻微加热溶解后不影响使用。为保证检测结果的准确性，操作环境温度控制在20±5℃。

（2）不同厂家、不同批号、不同品种试剂不能混用。

（3）严格按说明书操作，并控制反应温度及反应时间。反应液需用微量移液器加注，微量移液器应定期校准。

（4）若包被板开封后不能一次用完，应将剩余板条和干燥剂放入塑封袋内封好，置2～8℃并限一周内用完。

（5）所有待检血清、废液、阴阳性对照血清等均按传染性污染物处理，121℃高压蒸汽灭菌30分钟或用2%NaOH消毒剂处理30分钟后废弃。

（6）待检血清要求 待检血清按常规方法采集，避免溶血或长菌。冰冻待检血清应避免反复冻融，出现混浊或沉淀应离心或过滤澄清后再检测。

【规格】 96孔/块，2块/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

(二)非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒内包装标签

兽用
非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒
96孔/块，2块/盒	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

抗原包被板
兽用
96孔/块	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

阳性对照血清
兽用
1.5ml/管	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

阴性对照血清
兽用
1.5ml/管	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

兔抗猪酶标二抗
兽用
12ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

样品稀释液
兽用
24ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

20倍浓缩洗涤液
兽用
50ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

底物液A
兽用
12ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

底物液B
兽用
12ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

终止液
兽用
12ml/瓶	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

血清稀释板
兽用
96孔/块	批准文号：
批 号：
有效期至：
【用法与判定】 详见说明书
【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。
【生产企业】
仅供兽医诊断使用

二、那西肽预混剂说明书和标签

（一）那西肽预混剂说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称：那西肽预混剂

商品名称：

英文名称：Nosiheptide Premix

汉语拼音：Naxitai Yuhunji

【主要成分】 那西肽

【性状】

【药理作用】 那西肽属于畜禽专用抗生素。对革兰氏阳性菌的抗菌活性较强，如葡萄球菌、梭状芽孢杆菌对其敏感。作用机制是抑制细菌蛋白质合成，低浓度抑菌，高浓度有杀菌作用。

本品混饲给药在消化道中很少吸收。

【适应证】 用于控制产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎。

【用法与用量】 以那西肽计。混饲：每1000 kg饲料，鸡40～80 g。连用7日。

【不良反应】 按推荐的用法与用量使用，暂未见不良反应。

【注意事项】

1.产蛋供人食用的鸡，在产蛋期不得使用。

2.本品对眼、鼻和呼吸道具有刺激性，使用时需做好防护，避免吸入粉尘和接触眼睛或皮肤。如果意外接触本品时可用清水清洗。长期或多次接触本品可能会引起过敏反应。

3.废弃本品或使用过的容器应进行无害化处理。

【休药期】 鸡2日

【规格】 （1）1000g∶10g（1000万单位） （2）1000g∶20g（2000万单位）

（3）1000g∶40g（4000万单位） （4）1000g∶80g（8000万单位）

【包装】

【贮藏】 密闭，在阴凉干燥处保存。

【有效期】 24个月

【批准文号】

【生产企业】

（二）那西肽预混剂标签

兽用

【兽药名称】

通用名称：那西肽预混剂

商品名称：

英文名称：Nosiheptide Premix

汉语拼音：Naxitai Yuhunji

【主要成分】 那西肽

【性状】

【适应证】 用于控制产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎。

【用法与用量】 以那西肽计。混饲：每1000 kg饲料，鸡40～80 g。连用7日。

【规格】 （1）1000g∶10g（1000万单位） （2）1000g∶20g（2000万单位）

（3）1000g∶40g（4000万单位） （4）1000g∶80g（8000万单位）

【批准文号】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】 至

【休药期】 鸡2日

【贮藏】 密闭，在阴凉干燥处保存。

【包装】

【生产企业】

三、泰拉霉素标签

兽用

【兽药名称】

通用名称：泰拉霉素

英文名称：Tulathromycin

汉语拼音：Tailameisu

【包装规格】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【运输注意事项】

【贮藏】遮光，密封，低于25℃保存。

【批准文号】

【生产企业】

附件5

那西肽残留检测方法标准（试行）

鸡可食性组织中那西肽残留量的测定 高效液相色谱法（试行）

1 范围

本方法规定了鸡可食性组织中那西肽的制样和高效液相色谱测定方法。

本方法适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏和皮+脂肪中那西肽残留量的检测。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

试样中残留的那西肽用乙腈提取，正己烷脱脂，高效液相色谱–荧光检测器测定，外标法定量。

4 试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1 试剂和材料

4.1.1 乙腈（CH3CN）∶色谱纯。

4.1.2 甲醇（CH3OH）∶色谱纯。

4.1.3 N,N–二甲基甲酰胺（HCON（CH3）2）∶色谱纯。

4.1.4 磷酸（H3PO4）。

4.1.5 正己烷（C6H14）。

4.2 溶液配制

磷酸溶液：量取磷酸0.25mL加水至1000mL，摇匀，即得。

4.3 标准品

那西肽（Nosiheptide，C51H43N13O12S6，CAS号：56377–79–8）：含量≥88.0%，或相当者。

标准溶液制备

4.4.1 标准储备液：精密称取那西肽标准品约25mg，于25mL量瓶中，用N,N–二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，配成浓度为1 mg/mL的标准储备液。–20℃保存，有效期6个月。

4.4.2 标准工作液：准确量取1 mg/mL标准储备液0.1 mL，于100mL量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度，配置成浓度为1 μg/mL的标准工作液。–20℃保存，有效期3个月。

4.5材料

有机微孔滤膜：0.22 µm。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器（FLD）。

5.2 分析天平：感量0.00001g和0.01g。

5.3 氮吹仪。

5.4 旋涡混合器：3000 转/分钟。

5.5 匀浆机。

5.6 离心机：3000 转/分钟。

5.7 振荡器。

6 试料的制备与保存

6.1试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

——取均质后的供试样品，作为供试试料。

——取均质后的空白样品，作为空白试料。

——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。

6.2 试料的保存

–20℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取（2±0.05）g试料于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，并加入陶瓷均质子，涡旋混匀，振荡提取10分钟；于5000 转/分钟离心5分钟，倾出上清液至另一个50 mL离心管中，剩余残渣用10 mL乙腈重复提取一次，合并两次提取上清液，加入20 mL正己烷，涡旋1分钟，5000转/分钟离心5分钟，弃去上层正己烷层，取下层液体40℃下氮吹至干；准确加入1.0 mL甲醇涡旋混匀1分钟，过滤膜后供高效液相色谱仪测定。

7.2 标准曲线的制备

分别精密量取标准工作液，用甲醇稀释成浓度为0.01、0.02、0.04、0.1、0.2 µg/mL的标准溶液，供高效液相色谱仪测定。临用前配制。以测得的峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

液相色谱参考条件

a)色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），或相当者；

b)柱温：30℃；

c)进样量：20 (L；

d)流速：1.0 mL/min；

e)荧光检测器：激发波长327 nm，发射波长521 nm；

f)流动相：磷酸溶液和乙腈，梯度洗脱程序见表1。

表1流动相梯度洗脱条件

时间

(min)	磷酸溶液

(%)	乙腈

(%)
0	52	48
8	52	48
8.1	0	100
12	0	100
12.1	52	48
17	52	48
7.4 定性测定

试样溶液色谱图的保留时间在标准溶液的保留时间偏差的±2.5%之内。

7.5 定量测定

取试样溶液和相应浓度的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中那西肽响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下，标准溶液、空白试样溶液和空白添加试样溶液色谱图见附录A中图A1～图A3。

7.6 空白试验

取空白试料，除不加标准溶液外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

8 结果计算与表述

单点校准，试料中那西肽残留量按下式计算：

或标准曲线校准：由标准曲线方程As =a Cs +b，求得a和b，则

按下式计算那西肽的残留量：

式中：

X——试样中相应的那西肽残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；

Cs——标准溶液中相应的那西肽浓度，单位为微克每升（μg/L）；

C——试样溶液中那西肽浓度，单位为微克每升（μg/L）；

A——试样溶液中相应的那西肽的色谱峰面积；

As ——标准溶液中相应的那西肽色谱峰面积；

V——溶解残余物所用的溶液体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）。

注：计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9 方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法的检测限为5μg/kg，本方法的定量限为10μg/kg。

9.2 准确度

本方法在10μg/kg～60μg/kg添加浓度水平上的回收率为60%～120%。

9.3 精密度

本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。

附录A

（资料性附录）

色谱图

图A1那西肽标准溶液色谱图（0.02 µg/mL）

图A2 鸡肝脏组织空白试样色谱图

图A3 鸡肝脏组织空白添加那西肽试样色谱图（10 μg/kg）